顯微鏡的景深計算方法。

顯微鏡的景深計算方法

景深在照相時是指成像畫面內(nèi)近處物體與遠處物體之間的距離，如果在一張照片內(nèi)近處的景物與遠處的景物都很清晰說明景深大。照相機的景深可以根據(jù)照片需要展現(xiàn)的效果做適當調(diào)整。顯微鏡一般都是垂直向下取景的，通過視場直徑內(nèi)觀察到的物體表面凸起的位置與凹下的位置都能夠看的很清楚時，那么凸點與凹點之間的高度差就是景深了，對于顯微鏡來說景深越大越好，景深越大在觀察高低不平整的物體表面時，能夠得到更好更立體的清晰度畫面。

顯微鏡的景深計算方法

景深表示,象平面上清晰的象所對應物平面的前后空間的深度：

d_tot=(λ_*n)/NA + n/(M?NA) * e

例：40.5um =（0.55um * 1）/0.1 + 1/(4*0.1)*14um (這里取中間值14um)

注：這里以4x物鏡為例

公式中：

d_tot：景深
NA ：數(shù)值孔徑
M ：總放大率
λ： 光波波長, （通常λ=0.55um）

n : 試樣與物鏡之間介質(zhì)的折射率（空氣: n=1、油: n=1.515）

e : 可分辨的最小距離，檢測器被放置在顯微鏡物鏡的像面，其橫向放大率是 M（e一般是4um、5um、6um......24um）

顯微鏡的景深計算方法

數(shù)值孔徑（N.A.）計算公式

數(shù)值孔徑是判斷物鏡性能（分辨率、焦深和亮度）的關鍵要素。

數(shù)值孔經(jīng)(N.A.)以下式計算。

N.A.=n×sinθ

n=試樣與物鏡之間介質(zhì)的折射率（空氣: n=1、油: n=1.515）

θ: 光軸與離物鏡中心最遠的折射光形成的角度。

顯微鏡的視野亮度（B）由與物鏡倍率（M）相關的下式求出。

數(shù)值孔徑（N.A.）越大，物鏡倍率越低，則以孔徑、倍率的平方

值亮度會增加。

B ∝ N.A.²/ M²