尼康顯微鏡雙頻激發(fā)塊DAPI-FITC
尼康顯微鏡雙頻激發(fā)塊DAPI-FITC
尼康雙激發(fā)帶通DAPI-FITC濾波器集合被設(shè)計(jì)用于同時(shí)檢測(cè)的流行的熒光團(tuán)的DAPI并且當(dāng)組合應(yīng)用的FITC（異硫氰酸熒光素），并結(jié)合了激發(fā)濾光片具有窄帶通窗中的紫（400-418nm）和藍(lán)色（478-495nm）光譜區(qū)。 紫外線(xiàn)和尼康顯微鏡DAPI-FITC濾光片組合可見(jiàn)光透射光譜圖說(shuō)明如下圖1中的雙發(fā)射（阻擋）濾波器的帶通區(qū)域，并入到單個(gè)濾光器，允許檢測(cè)來(lái)自?xún)蓚€(gè)熒光染料的藍(lán)色和綠色發(fā)射同時(shí)，同時(shí)盡量減少探針之間的頻譜交叉。 透射和反射帶的每一個(gè)濾光器，以及具有兩個(gè)帶通透射區(qū)域二色性反射鏡的應(yīng)用程序之間的急劇過(guò)渡（多色;選擇為互補(bǔ)的發(fā)射和激發(fā)波長(zhǎng)），允許雙波段信號(hào)檢測(cè)以*小的干擾。
雙激發(fā)濾波器模塊DAPI-FITC規(guī)格：
激發(fā)波長(zhǎng)篩選：400-418nm（帶通，409 CWL）和478-495nm（帶通，487 CWL）
多色鏡波長(zhǎng)：435-470nm（帶通）和505-570nm（帶通）
屏障過(guò)濾波長(zhǎng)：450-465nm（帶通，458 CWL）和510-555nm（帶通，533 CWL）
在DAPI-FITC雙波段熒光濾波器組合被用于同時(shí)檢測(cè)所述熒光染料DAPI和FITC與頻帶之間的*小串?dāng)_的專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的，并且可以與其他對(duì)具有相似光譜分布的熒光探針的使用。 濾波器組的較短波長(zhǎng)信道將選擇狹義的光譜區(qū)為紫色激發(fā)和藍(lán)色發(fā)射的檢測(cè)，而較長(zhǎng)的波長(zhǎng)分量對(duì)應(yīng)于藍(lán)色激發(fā)綠色發(fā)光檢測(cè)。 短波長(zhǎng)激發(fā)通帶傳輸簡(jiǎn)檔被刻意降低，以提供與藍(lán)色激發(fā)熒光信號(hào)更好的平衡。 研究以下的熒光團(tuán)的各種組合時(shí)，此濾波器組建議：DAPI，藍(lán)色熒光蛋白（BFP）或Hoechst 染料（紫色激發(fā)），配對(duì)用FITC，綠色熒光蛋白（GFP），的Cy2，或的Alexa Fluor 488（藍(lán)激發(fā)）。 在圖2中呈現(xiàn)的圖像表明具有多種針對(duì)不同細(xì)胞內(nèi)位置的熒光探針對(duì)這個(gè)濾波器組合的性能。
示于圖2（a）是使用DAPI-FITC濾波器塊和印度麂的鹿皮沾上的Alexa Fluor 488綴合鬼筆環(huán)肽，其結(jié)合到細(xì)胞內(nèi)絲狀肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)的成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)的熒光發(fā)射輪廓。 的可見(jiàn)光*大吸收的Alexa Fluor 488的是495nm，并且*大發(fā)射發(fā)生在519nm，在光譜的綠色區(qū)域中。另外，將試樣同時(shí)用DAPI染色（靶向DNA在細(xì)胞核中;激發(fā)在358nm，并且發(fā)射在461nm）和MitoTracker紅CMXRos（靶向線(xiàn)粒體;紅色發(fā)光）。 注意沒(méi)有來(lái)自紅色熒光團(tuán)（MitoTracker）信號(hào)，但明亮的綠色熒光的肌動(dòng)蛋白絲和從DAPI細(xì)胞核的稍低強(qiáng)度藍(lán)色信號(hào)表現(xiàn)出的存在。(奧林巴斯顯微鏡)
小鼠腸沾上的Alexa Fluor 350麥胚凝集素，藍(lán)色熒光的凝集素特定于杯狀細(xì)胞的粘液的薄膜部，是在圖2（b）中。 另外，將試樣同時(shí)沾上的Alexa Fluor 568鬼筆環(huán)肽（絲狀肌動(dòng)蛋白; 600nm發(fā)射）和SYTOX綠（核; 504nm激發(fā)和523nm發(fā)射）。 注意從藍(lán)色熒光團(tuán)（Alexa Fluor 350），但是核中的組織標(biāo)本的明亮的綠色熒光的低信號(hào)電平由于SYTOX綠熒光。 這種雙重激發(fā)濾光片組合有效地消除了紅色（的Alexa Fluor 568）探測(cè)信號(hào)。
如圖2（c）展示了從大鼠袋鼠（PTK2）上皮細(xì)胞的培養(yǎng)物被認(rèn)為免疫熒光標(biāo)記的同隨后山羊綴合的Alexa Fluor 488抗-小鼠Fab片段初級(jí)抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的熒光發(fā)射強(qiáng)度。另外，將試樣標(biāo)記用Hoechst 33258，其選擇性地結(jié)合到DNA中的細(xì)胞核，和MitoTracker Red CMXRos（靶向線(xiàn)粒體;紅色熒光）。 注意突出綠色染色，在整個(gè)細(xì)胞質(zhì)延伸的細(xì)胞內(nèi)微管網(wǎng)絡(luò)，和從Hoechst 33258的藍(lán)色發(fā)射綁定到DNA的細(xì)胞核中。 在圖像的下部的細(xì)胞中出現(xiàn)前中期或中期狀態(tài)下進(jìn)行有絲分裂。
瑞士小鼠（3T3線(xiàn)）細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記的同隨后山羊綴合的Alexa Fluor 568抗-小鼠Fab片段初級(jí)抗細(xì)胞色素氧化酶的小鼠單克隆抗體，圖2（d）是示出。 將試樣也標(biāo)記有幾個(gè)額外的探針，包括凝集素羅馬蝸牛凝集素（HPA）的綴合的Alexa Fluor 488（綠色發(fā)光），其選擇性地結(jié)合糖蛋白在該細(xì)胞系中的高爾基體。 細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白絲染色的Alexa Fluor 680（紅色激發(fā);近紅外輻射）和核DNA標(biāo)記有DAPI（藍(lán)色發(fā)光）。 注意高爾基體的突出綠色染色，并在細(xì)胞核中觀(guān)察到的藍(lán)色熒光強(qiáng)度。
由薄小鼠腎臟的部分沾上多個(gè)（3）的熒光團(tuán)的熒光發(fā)射是在圖2（e）所示。 在組織切片細(xì)胞核靶向與核酸探針的DAPI，當(dāng)在細(xì)胞培養(yǎng)物和組織切片結(jié)合到DNA，其具有*大激發(fā)在358nm，并且具有發(fā)射*大值在461nm。 另外，低溫恒溫器部也同時(shí)沾上的Alexa Fluor 488麥胚凝集素（腎小球和曲小管）和Alexa Fluor 568鬼筆環(huán)肽（絲狀肌動(dòng)蛋白和刷狀緣）。 注意信號(hào)的同時(shí)從藍(lán)色（DAPI）和綠（的Alexa Fluor 488）的探針，但由于沒(méi)有橙紅色熒光由于將Alexa Fluor 568綴合物中的肌動(dòng)蛋白和刷狀緣的網(wǎng)絡(luò)的存在。
從玉米籽粒的自發(fā)熒光發(fā)射（ 玉蜀黍 ）薄膜部中演示了圖2（f）所示。 在植物組織中的內(nèi)源性的自發(fā)熒光產(chǎn)生于各種生物分子，包括葉綠素，β-胡蘿卜素，葉黃素和。 在紫外和藍(lán)色激發(fā)區(qū)域，葉綠素具有吸收帶，具有高消光系數(shù)，并產(chǎn)生一個(gè)顯著量熒光在與350和500nm之間的波長(zhǎng)激發(fā)。 對(duì)于以上所示的玉米仁組織，注意自發(fā)熒光發(fā)射強(qiáng)度中的藍(lán)色和綠色光譜區(qū)域的存在，這是尼康DAPI-FITC熒光濾波器組合的特性。