奧林巴斯顯微鏡熒光漂白學(xué)術(shù)

2020-08-27 10:37:14 奧林巴斯顯微鏡

奧林巴斯顯微鏡熒光漂白學(xué)術(shù)

在光漂白(FLIP)兩者熒光丟失和恢復(fù)的光漂白(FRAP)后的相關(guān)方法是技術(shù)通過熒光的光漂白觀察細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)的移動。浮動熒光染料在細(xì)胞膜上的特定區(qū)域,細(xì)胞器(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體)膜,或這些膜浮動熒光標(biāo)記蛋白是漂白,損失或熒光的恢復(fù)觀察,研究流動性橫向方向上(參見圖1)。被FLIP和FRAP的技術(shù)也可以用來確認(rèn)膜的連續(xù)性。

奧林巴斯顯微鏡

*近的一項研究被進(jìn)行,其中細(xì)胞骨架蛋白標(biāo)記的熒光染料,以確認(rèn)構(gòu)成微管和中等尺寸的長絲(10納米細(xì)絲)發(fā)生蛋白如何周轉(zhuǎn)(替換)(Wikstrom等人,1992)。在本研究中提出的技術(shù)可以被用于確定是否FLIP發(fā)生在末端或在長絲的中間。 

奧林巴斯顯微鏡用FLIP和FRAP實驗*近變得更容易進(jìn)行,由于使用綠色熒光蛋白(兩性平等問題協(xié)調(diào))的。兩性平等問題協(xié)調(diào)可以在細(xì)胞中表達(dá)為融合蛋白與靶蛋白。前兩性平等問題協(xié)調(diào)成為可能,此類蛋白的行為中所需要的細(xì)胞骨架蛋白,觀察到純化,熒光標(biāo)記和導(dǎo)入細(xì)胞通過顯微注射的方法。

光漂白的熒光損失

細(xì)胞器膜中,包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng),高爾基體和細(xì)胞核的細(xì)胞的連續(xù)性已被翻轉(zhuǎn)驗證。后所感興趣的區(qū)域已被光漂白,熒光迅速被擴散的方法回收。當(dāng)在同一地區(qū)已多次漂白,整個細(xì)胞器膜的熒光消失,表明熒光浮在細(xì)胞器膜。

熒光漂白后恢復(fù)

一種熒光染料預(yù)先綴合與靶蛋白分子或脂質(zhì)膜被漂白時的試樣中感興趣的區(qū)域和FRAP是用來觀察由擴散的手段,通過染料周轉(zhuǎn)如何在漂白的部分的熒光恢復(fù)。




標(biāo)簽: 熒光漂白