尼康顯微鏡相差怎么對準(zhǔn)
相襯顯微鏡的仔細(xì)比對是必要的，以便產(chǎn)生*大的反差效果，而不會引入降解標(biāo)本外觀或?qū)е洛e誤的解讀文物。 這種互動式教學(xué)探討變化的時候，聚光鏡環(huán)被移入和移出對準(zhǔn)相位板的物鏡是通過目鏡（在不同的放大倍數(shù)）怎么標(biāo)本出現(xiàn)。
本教程初始化與標(biāo)本出現(xiàn)在顯微圖像窗口上的教程的右側(cè)隨機(jī)選擇的相襯。 鄰近該窗口是物鏡后側(cè)焦點面的圖（題為物鏡后側(cè)焦平面 ;在左側(cè)）示出了物鏡相位板和聚光鏡的環(huán)形帶的附近。 默認(rèn)情況下，物鏡相位板和聚光鏡環(huán)光錐是不對齊的，必須使用X-翻譯和y平移滑塊被重新定位。 將這些滑動件使操作者能夠調(diào)節(jié)聚光鏡環(huán)形光錐的位置相對于所述固定物鏡相板。當(dāng)兩個環(huán)體被集中時，獲得*大可能的標(biāo)本對比度。
作為替代平移滑塊，鼠標(biāo)光標(biāo)可用于在窗口內(nèi)拖動聚光鏡環(huán)形圖像，以便它可以在物鏡相位板的周邊之內(nèi)的任何位置。 新的標(biāo)本可以被加載到本教程通過使用選擇A試片下拉菜單，物鏡放大倍數(shù)可以通過選擇物鏡菜單中更改。 一個新的標(biāo)本或物鏡選擇每一次，教程會自動重新加載的隨機(jī)偏差聚光鏡環(huán)和物鏡相環(huán)。
而使用伯特蘭透鏡或相位望遠(yuǎn)鏡觀看的物鏡的固定相環(huán)時，操作者可以再執(zhí)行調(diào)整到聚光鏡環(huán)形位置來對齊兩個用于相襯觀察（參見圖1）。 示于圖1是物鏡的后側(cè)焦點面上的未對準(zhǔn)的圖像（圖1（a）和圖1（c））和后聚光鏡纖維環(huán)和相位環(huán)已被正確地對準(zhǔn)（圖1（e））。 也示于該圖中是通過目鏡（圖1（b），1（d）和1（F）），這表明，當(dāng)在顯微鏡未對準(zhǔn)試樣的顯示方式（圖1（觀看時，出現(xiàn)在相應(yīng)的圖像b）和圖1（d）），并仔細(xì)對齊（圖1（F））按照下面列出的步驟。
在試圖使一個顯微鏡相襯觀察，檢查儀器仔細(xì)，以確保所有物鏡包含相位板，并牢固地安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器。 物鏡還應(yīng)該順序地排列在其上排列的物鏡轉(zhuǎn)換器，從低到高的放大倍率，以便*大限度地減少1聚光鏡的環(huán)形帶和另一個之間切換的頻率。 通常情況下，10倍和20倍的物鏡，有著共同的聚光鏡環(huán)，因為這樣做的40倍和60倍的物鏡。 高度校正物鏡，如專為油浸apochromats，往往有相似的數(shù)值孔徑，并使用相同的聚光鏡環(huán)在更寬的范圍內(nèi)放大倍率（40倍到100倍）。 低倍率相位對比（4倍和5倍），通常需要一個擺動鏡頭聚光鏡和聚光鏡專用環(huán)。
聚光鏡環(huán)形板也應(yīng)順序排列，從設(shè)計用于低倍率物鏡的環(huán)形空間，并繼續(xù)直至1設(shè)計的*高放大倍數(shù)。 在一般情況下，在整個放大率范圍可覆蓋三個或四個獨立的環(huán)。 如果一個普遍的聚光鏡采用，定位*低的放大倍率環(huán)（例如，PHL或PH1）到明槽的右邊，而其他板塊在周邊槽順序。 通常，試樣必須檢查在之前或之后相襯觀察明場，所以這種布置將提供一個容易的工作流程。
被推薦為相襯顯微鏡的對準(zhǔn)下面的步驟。
放置一個明亮的染色標(biāo)本在載物臺上旋轉(zhuǎn)10X相襯物鏡成明照明模式下的光學(xué)通路。聚焦樣本，并關(guān)閉該視場光闌，直到它進(jìn)入視場的邊緣。 用聚光鏡高度調(diào)節(jié)旋鈕，定位臺下聚光所以各樹葉的視場光闌的是在清晰聚焦，并利用主聚光鏡定心調(diào)整旋鈕，以確保視場光闌的中心在視場中。 請仔細(xì)檢查顯微鏡配置，以確?？评照彰饕呀?jīng)實現(xiàn)，并且標(biāo)本是在大家關(guān)注的焦點。
取出染色標(biāo)本，并放置一個階段標(biāo)本在顯微鏡載物臺上。 在情況下，物鏡試樣僅具有*小的光程差（和可能難以顯現(xiàn)），配合已知能產(chǎn)生高對比度的相襯模式標(biāo)本的顯微鏡。 轉(zhuǎn)動聚光器轉(zhuǎn)盤直到適當(dāng)?shù)沫h(huán)形定位在光路徑（ 的Ph1或等效為10x物鏡）。 檢查以確保聚光鏡環(huán)顏色代碼或題詞相匹配的物鏡。 檢查聚光鏡孔徑光闌調(diào)節(jié)桿的位置，并將其移動到*寬光圈位置（專為相襯聚光鏡可自動執(zhí)行此操作）。
如果顯微鏡配備一個伯特蘭透鏡，使用指輪控制的透鏡擺動到位。 另外，取出顯微鏡目鏡中的一個，并插入一個階段望遠(yuǎn)鏡進(jìn)入觀察筒。
同時通過目鏡或相位望遠(yuǎn)鏡窺視，調(diào)整勃氏鏡或望遠(yuǎn)鏡聚焦眼球管的焦點，直到在物鏡相板是大家關(guān)注的焦點，和聚光鏡環(huán)和黑暗的中性密度材料的明亮的圖像之間的重疊相位板是顯而易見的。 在許多情況下，在顯微鏡*初將不對準(zhǔn)和纖維環(huán)的圖像將不能準(zhǔn)確地疊加在中性密度材料中的相位板（如圖1（a）和圖1（c））。
定位在聚光鏡環(huán)形定心銷（或螺釘）與調(diào)節(jié)環(huán)的位置用一對螺絲起子或適當(dāng)?shù)男o，直到它是一致的物鏡標(biāo)相位板（圖1（e））。 注意：不要試圖調(diào)整聚光鏡環(huán)的位置與主聚光鏡定心旋鈕（通常位于連接到顯微鏡聚光鏡安裝支架）。 這方面的努力可能不會達(dá)到預(yù)期的聚光鏡環(huán)對準(zhǔn)肯定會危及先前應(yīng)該已經(jīng)建立了科勒照明條件。
當(dāng)聚光鏡纖維環(huán)在正確的位置時，光通過該環(huán)通過聚光鏡將被施加到物鏡相位板，降低了環(huán)形圖像的強(qiáng)度的中性密度材料被衰減。 因此，如果聚光器環(huán)形不當(dāng)居中，明亮的月牙邊會出現(xiàn)相鄰的物鏡相位板的中性密度材料（圖1（a）和圖1（c））。如果環(huán)的形象不相板的黑圓內(nèi)放不下，那么無論是聚光鏡失焦（和科勒照明是不成立的），或相望遠(yuǎn)鏡（或伯特蘭鏡頭）不集中的物鏡后側(cè)焦點面。 在某些情況下，甚至當(dāng)相望遠(yuǎn)鏡（或伯特蘭鏡頭）和臺下聚光正確聚焦，聚光環(huán)圖像模糊，并出現(xiàn)失焦。 這可以通過從檢體低頻衍射引起的。 如果發(fā)生這種情況，從載物臺上移除標(biāo)本，并進(jìn)行顯微鏡對準(zhǔn)。
如果聚光鏡環(huán)形圖像是顯著不同的尺寸從該物鏡相位板，檢查是否錯環(huán)形板已被安裝在所述聚光鏡（*可能的原因）。 另一種可能性，如果高數(shù)值孔徑的油浸物鏡被采用，是在聚光鏡前透鏡元件被設(shè)計為浸入。 在這種情況下，它可能是困難的（或不可能）疊加在相位板聚光鏡環(huán)形無油的聚光透鏡和所述顯微鏡載玻片（和/或所述物鏡和蓋玻片之間）之間的壓降。
當(dāng)聚光鏡環(huán)和物鏡相板在適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，在圖1（e）所示的圖像應(yīng)該出現(xiàn)在階段望遠(yuǎn)鏡目鏡或用勃氏鏡到位。 在這一點上，在顯微鏡的配置是否正確觀察相襯照明試樣。
用目鏡代替階段望遠(yuǎn)鏡，或旋轉(zhuǎn)伯特蘭透鏡出光路徑，并檢查標(biāo)本。 背景應(yīng)該出現(xiàn)在色的中性灰色（取決于物鏡相位板的中性密度）與在高對比度可見的試樣。
一旦顯微鏡已經(jīng)對準(zhǔn)相位相反，它通常會保持其中心定位為相當(dāng)數(shù)量的物鏡/年輪的變化，但應(yīng)定期檢查，以確保正確對齊。 如果在顯微鏡開始偏離了對齊，出現(xiàn)在目鏡（或在計算機(jī)顯示器上）的圖像將出現(xiàn)越來越多像那些明照明觀察。