奧林巴斯顯微鏡共聚焦顯微鏡的詞匯

2020-09-03 14:41:42

 

  • 吸光度(Optical Density) -光通過(guò)化學(xué)或生物物質(zhì)的測(cè)定的分光光度計(jì)或類似的裝置所吸收的量。 吸光度的單位是等于倒數(shù)透射率(透射光強(qiáng)度對(duì)入射光強(qiáng)度之比)的對(duì)數(shù)。 吸收帶通常覆蓋一個(gè)較寬波長(zhǎng)范圍內(nèi)(數(shù)十或數(shù)百個(gè)),并通常繪制成強(qiáng),傳輸,或光密度與波長(zhǎng)的關(guān)系。

  • 聲光可調(diào)諧濾波器(AOTF) -其利用聲波來(lái)調(diào)制光通過(guò)激光或非相干照明源(主要是電弧放電燈)發(fā)出的光的波長(zhǎng)或強(qiáng)度的過(guò)濾設(shè)備。 該過(guò)濾器由一個(gè)專門的晶體,諸如碲氧化物或石英,一個(gè)聲換能器和吸收器以誘導(dǎo)站在聲波具有高和低折射率交替的域夾著的。 如任一偏振光或非偏振光穿過(guò)過(guò)濾器,該晶體作為衍射光柵偏轉(zhuǎn)入射光束。 特定波長(zhǎng)的光被通過(guò)改變輸送到晶體的聲波的頻率,從而改變衍射光柵的周期選定。

  • 吖啶橙 -含吖啶核,其中結(jié)合DNA和RNA通過(guò)連續(xù)的堿基對(duì)之間插來(lái)產(chǎn)生一個(gè)**的,但很寬的發(fā)射帶在綠色到紅色的波長(zhǎng)區(qū)域A氮雜環(huán)發(fā)色團(tuán)。 吖啶橙是由藍(lán)綠色激光(488納米)或由耦合到電弧放電燈(汞或氙氣)的紫外線,紫色和藍(lán)色干涉濾光片激發(fā)。 熒光團(tuán)是一個(gè)很好的候選,用于顯示許多蜂窩結(jié)構(gòu),但是因?yàn)閷挼?a title='發(fā)射光' target='_blank' class='seolabel'>發(fā)射光譜不用于多探針染色是有用的。

  • Alexa Fluor染料 -合成熒光共軛染料,由Molecular Probes公司的商標(biāo),是用于標(biāo)記抗體,核酸,并作為蛋白質(zhì)一般有用的探針,細(xì)胞骨架分子,脂質(zhì),和一般的神經(jīng)。 激發(fā)和發(fā)射光譜的Alexa Fluor染料跨越紫外區(qū)域和整個(gè)可見光光譜的更高波長(zhǎng)的部分,甚至延伸到近紅外頻率。 在一般情況下,的Alexa Fluor染料是很**的高穩(wěn)定性和抗光漂白。

  • 衰減(Blocking)等級(jí) -減少的可見光或紫外線光信號(hào)或抑制前的光學(xué)系統(tǒng),例如在熒光顯微鏡中被檢測(cè)到。 衰減的程度,通常表示在特定波長(zhǎng)或波長(zhǎng)范圍的相對(duì)強(qiáng)度或*光密度的函數(shù)。 衰減,也被稱為調(diào)制的光強(qiáng)度或堵塞 ,可以完成與中性密度濾光片或聲光可調(diào)諧濾波器(AOFT)共聚焦顯微鏡。

  • 自體熒光(Primary Fluorescence) -背景熒光由于內(nèi)源性代謝物和有機(jī)或無(wú)機(jī)存在于生物標(biāo)本等材料熒光化合物的產(chǎn)生。 在某些情況下,自發(fā)熒光是足夠高的強(qiáng)度,以與來(lái)自熒光標(biāo)記的分子的預(yù)期信號(hào)相混淆的。 自身熒光在生物細(xì)胞和組織的常見來(lái)源是黃素,黃素蛋白和核苷酸(FADFMN),B族維生素,還原吡啶核苷酸(NADHNADPH),脂肪酸,細(xì)胞色素,卟啉,lipofuchsin顏料,色胺和兒茶酚胺。 自體熒光在植物細(xì)胞中的葉綠素(紅色熒光)和木質(zhì)素(綠色熒光)主要派生。 一般情況下,自發(fā)熒光發(fā)射*大的時(shí)候活細(xì)胞檢查與藍(lán)色和紫外線激發(fā)波長(zhǎng)。

  • 自動(dòng)熒光細(xì)胞圖像分析儀(AFIC) -再加上電腦顯微系統(tǒng)(反射光熒光顯微鏡,低光級(jí)相機(jī)和計(jì)算機(jī)),使染色標(biāo)本的可靠,準(zhǔn)確的檢測(cè)高速自動(dòng)篩選熒光探針的應(yīng)用的幾乎所有的細(xì)胞。 在臨床標(biāo)本中的疾病標(biāo)志物可以使用這種技術(shù),通過(guò)使用連接到抗體或核酸特異和敏感的熒光染料進(jìn)行監(jiān)測(cè)。 目標(biāo)熒光團(tuán)的有選擇性的激勵(lì)產(chǎn)生的圖像具有高的信號(hào)噪聲比進(jìn)一步增加檢測(cè)的靈敏度。

  • 平均傳輸 -在過(guò)濾器的命名法,平均傳輸指的是光在一個(gè)特定的區(qū)域(可使用發(fā)送頻帶),而不是在整個(gè)頻譜上傳輸?shù)钠骄健?/span> 在一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的帶通濾波器,平均透射區(qū)域橫跨全寬的傳輸頻帶的半*大值(FWHM)。 在長(zhǎng)通和shortpass過(guò)濾器,該術(shù)語(yǔ)表示過(guò)去的切口上和截止波長(zhǎng)的發(fā)射波長(zhǎng)區(qū)域,分別為。

  • 背景 -探測(cè)光(噪聲),是不是從一個(gè)熒光探針的發(fā)射信號(hào)的一部分。 背景噪聲來(lái)源包括激發(fā)和發(fā)射濾光片之間的串?dāng)_,從激發(fā)和發(fā)射濾光片文物針孔泄漏的光,在安裝介質(zhì)中,非特異性熒光染色,數(shù)碼攝像系統(tǒng)電子噪聲,以及自發(fā)熒光熒光的出血。 理想情況下,在熒光顯微鏡的背景應(yīng)該是漆黑*大化的標(biāo)本對(duì)比度。

  • 帶通濾波器 -雖然有衰減光的波長(zhǎng)更短的兩個(gè)比通帶較長(zhǎng)的傳輸定義的波長(zhǎng)區(qū)域(或帶)的濾波器。 發(fā)送的頻帶的中心波長(zhǎng)被稱為中心波長(zhǎng) (通常簡(jiǎn)寫CWL)。 的有效帶寬是由全寬半高(FWHM)的傳輸,可以將可選地稱為半帶寬(HBW)表示。 帶通濾波器通常采用的激勵(lì),少的時(shí)候,在熒光顯微鏡作為屏障過(guò)濾器。

  • 屏障 (Emission)濾波器 -一種光學(xué)濾波器,通常設(shè)計(jì)成一個(gè)長(zhǎng)通或具有定義良好的帶通區(qū)域,其中透射從樣本同時(shí)阻止殘余激勵(lì)光收集由物鏡的熒光發(fā)射波長(zhǎng)。 屏障過(guò)濾器通常使用制作彩色玻璃或多個(gè)干涉腔,并匹配套,激發(fā)濾光片和二色鏡,以產(chǎn)生*佳的效果。(本文來(lái)源:奧林巴斯顯微鏡共聚焦顯微鏡的詞匯

  • 分束器 -用于分離光的入射波束成被隨后投射在不同方向上的兩個(gè)或多個(gè)組件的一個(gè)常見的光學(xué)裝置。 分束器,可在多種配置以滿足特殊要求。 三目觀察筒組件的光學(xué)顯微鏡利用棱鏡分光器來(lái)同時(shí)指揮成像光束的目鏡和一個(gè)傳統(tǒng)或數(shù)碼相機(jī)系統(tǒng)。偏振分束器是由一個(gè)晶體的雙折射材料,以產(chǎn)生線偏振光。 在熒光顯微鏡,雙色(通常稱為分色)鏡作為分光鏡反射激發(fā)波長(zhǎng)回源,而發(fā)射波長(zhǎng)更長(zhǎng)的二次熒光發(fā)射到目鏡或探測(cè)器。

  • 生物發(fā)光 -一個(gè)生化氧化過(guò)程,導(dǎo)致能量的釋放作為發(fā)射光。 螢火蟲發(fā)光,這需要酶的熒光素酶催化底物螢光素和分子氧之間的反應(yīng)(以三磷酸腺苷的存在),是生物發(fā)光的一個(gè)常用例子。 這種現(xiàn)象發(fā)生在多種海洋生物和昆蟲。

  • 放氣通過(guò)(Crossover)  -放氣通過(guò)時(shí)或不需要的波長(zhǎng)是通過(guò)設(shè)計(jì)來(lái)阻止它們的光學(xué)濾光器發(fā)生交叉。 效果通常發(fā)生在一個(gè)過(guò)濾器的設(shè)計(jì)不允許波長(zhǎng)不包括在帶通區(qū)域的完全相消干涉。 滲出通過(guò)也是一個(gè)問(wèn)題,當(dāng)入射光的角度是相對(duì)于所述過(guò)濾器表面的高度傾斜時(shí),或者當(dāng)熒光染料的激發(fā)和發(fā)射光譜重疊。

  • 籠中的熒光基團(tuán) -一熒光通常是共價(jià)連接到隔離罩部分(通常是一個(gè)有機(jī)結(jié)構(gòu)),但可以通過(guò)光的脈沖光解被釋放( 解籠鎖 )。 典型的熒光染料使用的是硝基芐基衍生物,其鎖定在熒光物質(zhì)成非熒光的互變異構(gòu)形式籠。 各種籠分子已被合成并用于實(shí)驗(yàn)。

  • 發(fā)色團(tuán) -天然存在的或合成的顏料具有特征的光吸收,通常含有交替的單鍵和雙鍵或環(huán)狀的芳族或雜環(huán)的共軛程度高的組合。 在光學(xué)顯微鏡,發(fā)色團(tuán)經(jīng)常提到古典染料,如曙紅,番紅或蘇木,用于組織染色的明場(chǎng)觀察。 因?yàn)樗麄儽憩F(xiàn)出在紫外線,可見光和/或近紅外波段的強(qiáng)吸收光譜熒光探針也被歸類為發(fā)色團(tuán)。

  • 相干反斯托克斯拉曼散射(CARS)顯微鏡 -相干反斯托克斯拉曼散射顯微鏡的主要優(yōu)點(diǎn)是,它使生物分子不添加合成的熒光標(biāo)記物或內(nèi)源耦合到熒光蛋白的調(diào)查。 相反,該技術(shù)是基于對(duì)目標(biāo)分子的振動(dòng)特性,并且不要求通過(guò)電子通過(guò)紫外線或可見光激發(fā)的物種。 在實(shí)踐中,快速(皮秒或更低)的激光脈沖在兩個(gè)來(lái)源的近紅外區(qū)域被聚焦到試樣用的顯微鏡物鏡和光柵掃描在橫向和軸向平面。 該脈沖由一個(gè)選定的分子的振動(dòng)模式是分開的頻率,并生成一個(gè)新的光束,其具有的波長(zhǎng)比入射光束更短,在目標(biāo)焦點(diǎn)上。 二次波束生成目標(biāo)物質(zhì)的濃度分布,并使得試樣的三維圖像的結(jié)構(gòu)。

  • 相干光 -甲光束,該光束由各個(gè)波的振動(dòng)同相位在同一平面上定義的,但也不一定。 為了維持長(zhǎng)距離相同的相位關(guān)系,相干光波必須是單色的(具有相同的波長(zhǎng))。 例如,激光是高度相干的,幾乎單色的,并且通常為線性偏振。

  • 冷鏡 -即工作在很寬的溫度范圍內(nèi),以反映整個(gè)可見光光譜,同時(shí)非常有效地傳送紅外線的波長(zhǎng)一個(gè)專門的雙色干擾濾波器。類似于熱鏡,冷鏡可設(shè)計(jì)為入射角為零和45度之間的范圍內(nèi),并用多層介質(zhì)膜的構(gòu)造,并以類似于干涉濾光器的方式。 冷鏡可以作為兩色分束器與激光系統(tǒng)反射可見光的波長(zhǎng),而紅外線傳輸。

  • 集電極鏡頭 -在寬視場(chǎng)熒光顯微鏡,聚光透鏡定位在弧放電燈,垂直照明燈之間。 現(xiàn)代lamphouses都配備了一個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕,使聚光透鏡的翻譯聚焦燈放電等離子體球。 收集透鏡收集的光在很寬的區(qū)域,并指示光,以用于傳輸?shù)奖粰z體的垂直照明的后部。 當(dāng)在熒光顯微鏡被配置為適當(dāng)?shù)目评照彰?,聚光透鏡,用于聚焦在冷凝器(目標(biāo))的前面開口的電弧等離子體的放大的實(shí)像。

  • 有色玻璃過(guò)濾器 -含設(shè)計(jì)吸收特定波長(zhǎng)的光,而自由地傳輸其他嵌入式膠體或溶解金屬玻璃過(guò)濾器。 在熒光顯微鏡,彩色玻璃濾光片曾一度廣泛使用的激發(fā)和屏障過(guò)濾器集和紫外光和紅外光作為有效的阻斷劑。

  • 共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM) -在這種聚焦的激光束橫向掃描沿x和樣本的Y軸的光柵模式光學(xué)顯微鏡的一種流行方式。所發(fā)射的熒光(反射光信號(hào))由一個(gè)光電倍增管檢測(cè)并在計(jì)算機(jī)顯示器上顯示的像素。 該像素的顯示尺寸是由電子設(shè)備的采樣率和光柵的尺寸決定。 所發(fā)射的遠(yuǎn)離焦平面信號(hào)光子被設(shè)在一個(gè)平面上的共焦與試樣的針孔光圈擋。 這項(xiàng)技術(shù)使試樣進(jìn)行光學(xué)沿z截面 。

  • 復(fù)合視圖(Projection View) -通過(guò)添加一起沿著共聚焦或多光子熒光顯微鏡z軸獲取的多個(gè)光纖段中創(chuàng)建一個(gè)看似三維圖像(該技術(shù)也可以用微分干涉對(duì)比光學(xué)使用)。 在傳統(tǒng)的寬視場(chǎng)熒光顯微鏡,立體標(biāo)本圖像常常模糊不清由于排放產(chǎn)生的遠(yuǎn)離直接焦平面。 當(dāng)用激光共聚焦顯微鏡采集的同一個(gè)圖像往往非常清晰。

  • 相聲 -在描述*小衰減(阻塞)級(jí)以上的兩個(gè)過(guò)濾器放在一起串聯(lián)(背到后端)在指定的范圍標(biāo)準(zhǔn)過(guò)濾器命名的術(shù)語(yǔ)。 過(guò)濾器的串?dāng)_程度應(yīng)該匹配的激勵(lì)和障礙(排放)過(guò)濾器熒光集時(shí)認(rèn)真考慮。 二色鏡通常包括在熒光濾光器組合串?dāng)_評(píng)估。 串?dāng)_降低或消除有助于提供未從乘法染色標(biāo)本,其光譜主要落在了濾波器組的帶寬熒光并發(fā)熒光發(fā)射圖像。

  • 花菁染料 (Cyanine Fluorochromes) -含有一個(gè)集中的雜環(huán)苯并惡唑基團(tuán),菁染料熒光探針首先由Amersham公司,這是眾所周知的高耐光性,水溶性好,而且比較高效的量子產(chǎn)率的程度銷售。 花青染料找到許多應(yīng)用中,作為蛋白質(zhì),核酸,和亞細(xì)胞組分的熒光標(biāo)記物。 的熒光染料,可以微調(diào)在分子水平上,以產(chǎn)生具有寬的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)光譜的衍生物,并且可以是在結(jié)構(gòu)上的改變,以控制溶解性,非特異性相互作用(降低背景噪聲),以及靶的反應(yīng)性。

  • 去卷積熒光顯微鏡 -反卷積分析是應(yīng)用算法以沿光(z)的所獲取的圖像的離焦堆棧軸線,以提高特定針對(duì)給定圖像平面上或在圖像堆棧多個(gè)焦平面光子信號(hào)的技術(shù)。 顯微鏡必須配備安裝于焦點(diǎn)齒輪組,以保證圖像采集在樣品焦平面之間的精確定義的時(shí)間間隔一個(gè)步進(jìn)電機(jī)。 在典型應(yīng)用中,反卷積分析被用于去模糊和從目的使用熒光激發(fā)和發(fā)射的特定焦平面除去失焦的光(盡管對(duì)于其他照明模式的技術(shù)中是有用的為好)。 *復(fù)雜的應(yīng)用應(yīng)用去卷積分析對(duì)整個(gè)圖像堆棧產(chǎn)生投影視圖或三維模型。

  • Descanning -允許光在共聚焦顯微鏡的樣品發(fā)射到由物鏡收集,并通過(guò)掃描鏡到二色鏡折回其路徑返回的過(guò)程。 當(dāng)descanning機(jī)制是正確對(duì)齊,在探測(cè)器針孔的熒光圖像現(xiàn)貨維持平穩(wěn),不抖動(dòng)。

  • 雙色分光器(Dichroic Mirror)  -一個(gè)干擾過(guò)濾器/鏡組合在熒光顯微鏡過(guò)濾器常用的設(shè)置來(lái)產(chǎn)生傳輸和反射波長(zhǎng)之間的清晰的過(guò)渡。當(dāng)在相對(duì)于入射照明和發(fā)射光束以45度角傾斜時(shí),二色鏡,通過(guò)一個(gè)90度角到標(biāo)本反映短的激發(fā)波長(zhǎng)和直通到目鏡和檢測(cè)器系統(tǒng)發(fā)送較長(zhǎng)的發(fā)射的熒光波長(zhǎng)的光。 制作與干涉薄膜為熒光顯微鏡二色鏡能反射90%以上的激發(fā)光的一個(gè)或多個(gè)同時(shí)發(fā)射約90%的發(fā)射帶的。 二色鏡通常是含有熒光濾光器的光學(xué)塊內(nèi)三濾(激發(fā),障礙,二色鏡)的中心元素。

  • 停留時(shí)間 -在共聚焦顯微鏡,指的時(shí)間長(zhǎng)度,該掃描激光束被允許保持在空間中的單元對(duì)應(yīng)于圖像中的單個(gè)像素的術(shù)語(yǔ)。 典型地,停留時(shí)間介于0.1到1微秒或更長(zhǎng)的時(shí)間,但設(shè)置的停留很長(zhǎng)的時(shí)間增加了光漂白速率并降低活細(xì)胞的生存能力。

  • 電子狀態(tài) -在一個(gè)原子或分子,而這又決定了負(fù)電荷(電子)的分子中的分布以及分子結(jié)構(gòu)的電子的整體結(jié)構(gòu)。 任何給定的分子可以通過(guò)多種電子態(tài)( 地面或多種興奮 )中的一個(gè)存在,這取決于總電子能量和電子的自旋對(duì)稱的軌道。 在室溫下,大多數(shù)的分子中存在的電子狀態(tài)用*少的能量(基態(tài))。 當(dāng)分子吸收一個(gè)光子,電子被激發(fā)到更高的能態(tài)(激發(fā)態(tài))。

  • 發(fā)射光譜 -通過(guò)后,它的原子或分子(熒光染料)的發(fā)射波長(zhǎng)的能帶(頻譜)被激勵(lì)而從另一個(gè)輻射源的光或能量的光子。后的熒光染料已發(fā)射的光子時(shí),它返回到地面層次的能量狀態(tài),并準(zhǔn)備進(jìn)行激發(fā)和發(fā)射的另一個(gè)周期。 通常情況下,熒光發(fā)射光譜,其被繪制為相對(duì)強(qiáng)度作為波長(zhǎng)的函數(shù),被定位在更長(zhǎng)的波長(zhǎng)的區(qū)域比刺激激發(fā)光譜(實(shí)際上,發(fā)射的平均波長(zhǎng)長(zhǎng)于激發(fā)的平均波長(zhǎng)) 。 此外,熒光發(fā)射光譜的波長(zhǎng)范圍和強(qiáng)度分布通常是獨(dú)立的激發(fā)波長(zhǎng)。

  • 落射照明(Reflected Light) -照明熒光的模式和反射光顯微鏡。 在一個(gè)反射或外延結(jié)構(gòu)中,照明源(通常被稱為一個(gè)垂直照射器)被放置在試樣上的目標(biāo),這既是聚光和成像透鏡系統(tǒng)的雙重作用的同一側(cè)。 在熒光顯微鏡包含的策略性定位在光路內(nèi),從試樣中的方向的燈反射激發(fā)光并發(fā)射發(fā)射的熒光的目鏡或探測(cè)器系統(tǒng)中的二色鏡。

  • 激勵(lì) (Exciter) 過(guò)濾器 -從匹配濾波器組(或?yàn)V波器立方體)在熒光顯微鏡的光學(xué)列車的*個(gè)元素。 激發(fā)濾光片,隨著其在該組貿(mào)易伙伴,通常被裝在垂直(EPI)照明器和過(guò)濾器選擇的區(qū)域從寬帶光源(如汞或氙弧光放電燈),以產(chǎn)生波長(zhǎng)的激動(dòng)人心帶為熒光顯微鏡。 激發(fā)濾光片經(jīng)常以使用干涉濾光器技術(shù)的選擇性帶通濾波器,但著色(染色)玻璃它們也可以構(gòu)成。

  • 激發(fā)光譜 -波長(zhǎng)的光譜,通常范圍從紫外和可見光光譜,其能夠激發(fā)熒光(原子或分子),以表現(xiàn)出熒光。 通過(guò)掃描,通過(guò)熒光染料或熒光團(tuán)的吸收光譜,同時(shí)監(jiān)測(cè)在一個(gè)單一的(峰值)波長(zhǎng)的發(fā)射所產(chǎn)生的激發(fā)光譜。 以類似的吸收光譜的方式,激勵(lì)是由于受激分子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)弛豫( 內(nèi)部轉(zhuǎn)換 )變寬。 吸收光譜和激發(fā)光譜是不同的,但往往重疊,有時(shí)候,他們幾乎沒(méi)有區(qū)別的程度。

  • 濾波器斜率 -光學(xué)濾光器的斜率是在過(guò)濾器配置文件中的過(guò)渡區(qū)域阻塞和變速器之間的指示。 在一般情況下,過(guò)濾器的斜率是由在該過(guò)濾器具有一個(gè)指定的阻塞電平并改變?cè)搮^(qū)域的速率的波長(zhǎng)來(lái)定義。 兩個(gè)過(guò)濾器可以有相同的截止點(diǎn)或截止波長(zhǎng),但仍然有顯著不同阻隔水平和斜坡。 非常尖銳的斜坡發(fā)射波長(zhǎng)的窄帶寬的截止或切上地區(qū),而淺的山坡有大的帶寬。

  • 熒光 -通過(guò)該過(guò)程的合適的原子或分子,這是瞬時(shí)由外部輻射的吸收在適當(dāng)?shù)哪芰克剑ㄍǔJ亲贤夤饣蚩梢姽猓┘ぐl(fā)時(shí),釋放所吸收的能量為具有更長(zhǎng)的波長(zhǎng)比吸收的能量的光子。 在熒光,電子提升到的激發(fā)軌道的配對(duì)(或相反的旋轉(zhuǎn))相對(duì)于在基態(tài)軌道的第二電子單重態(tài)。 其結(jié)果,返回電子的基態(tài)是自旋允許的 ,并迅速與光子的伴隨發(fā)射發(fā)生。 熒光激發(fā)和發(fā)射過(guò)程通常發(fā)生在不到一納秒。

  • 熒光各向異性 -一個(gè)術(shù)語(yǔ),指熒光團(tuán)的光致激發(fā),由于吸收偶極矩與傳入的光子的電矢量的瞬時(shí)對(duì)齊。 類似于激發(fā),由激發(fā)的熒光團(tuán)的熒光發(fā)射發(fā)生在平行于發(fā)射偶極矩的平面取向。 過(guò)渡(偶極)矩為激發(fā)和發(fā)射具有已定義的取向相對(duì)于染料分子的分子軸,并且彼此以一定角度隔開。 在激發(fā)態(tài)壽命,熒光團(tuán)的旋轉(zhuǎn)將其去極化發(fā)射相對(duì)于所述聲源矢量,從而產(chǎn)生了一種機(jī)制,用以測(cè)量包含熒光團(tuán)的環(huán)境的剛性(粘度)。 熒光各向異性被定義為強(qiáng)度平行于激發(fā)光的偏振電矢量和垂直于所述載體的強(qiáng)度,通過(guò)總強(qiáng)度除以發(fā)射之間的差的比率。

  • 熒光相關(guān)光譜(FCS) -用激光掃描共聚焦或多光子顯微鏡用為主,熒光相關(guān)光譜法是一種設(shè)計(jì)用來(lái)確定在只包含一個(gè)或幾個(gè)分子,產(chǎn)生對(duì)化學(xué)反應(yīng)速率,擴(kuò)散系數(shù),分子量信息量分子動(dòng)力學(xué)技術(shù),流速,和聚集。 在FCS,小體積(約1 femtoliter)照射聚焦的激光束以記錄從占用量作為時(shí)間的函數(shù)的分子數(shù)或量子產(chǎn)率所產(chǎn)生的自發(fā)熒光強(qiáng)度的波動(dòng)。 相對(duì)較小的熒光擴(kuò)散迅速通過(guò)照射量產(chǎn)生強(qiáng)度短,隨機(jī)掃射。 與此相反,更大的復(fù)合物(熒光團(tuán)結(jié)合到大分子)移動(dòng)更慢,產(chǎn)生一個(gè)更長(zhǎng),更持久的時(shí)間依賴性熒光強(qiáng)度的圖案。

  • 熒光壽命成像顯微術(shù)(FLIM -一種復(fù)雜的技術(shù),可同時(shí)記錄兩者的熒光壽命和熒光團(tuán)的整個(gè)圖像中的每個(gè)位置的空間位置。 該方法提供了一種機(jī)制,調(diào)查環(huán)境參數(shù),例如pH值,離子濃度,溶劑的極性,以及在單個(gè)活細(xì)胞中的氧張力,呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)在時(shí)間和空間排列。 納秒激發(fā)態(tài)壽命的FLIM的測(cè)量是獨(dú)立的局部熒光濃度,漂白文物,路徑長(zhǎng)度(試樣厚度),但要激發(fā)態(tài)反應(yīng),如共振能量轉(zhuǎn)移敏感。

  • 熒光損失在漂白(FLIP) -在涉及到FRAP,熒光的活細(xì)胞內(nèi)定義的區(qū)域的技術(shù)是通過(guò)激烈的照射光照受到反復(fù)漂白。 在一個(gè)測(cè)量時(shí)間段,這個(gè)動(dòng)作將導(dǎo)致熒光信號(hào)的完全損失整個(gè)細(xì)胞,如果所有的熒光團(tuán)能夠擴(kuò)散到正被光漂白的區(qū)域。 通過(guò)計(jì)算在該熒光從整個(gè)細(xì)胞消失的速度,目標(biāo)熒光團(tuán)的擴(kuò)散遷移率可以被確定。

  • 熒光顯微鏡 -一個(gè)流行的臨床和研究的技術(shù)在光學(xué)顯微鏡,它依賴于熒光分子的激發(fā)與特定的波長(zhǎng)區(qū)域,以產(chǎn)生由在較長(zhǎng)的波長(zhǎng)的二次發(fā)射的熒光所產(chǎn)生的圖像。 現(xiàn)代熒光顯微鏡配備有反射光照明,納入中性密度濾光片和干涉濾光片一個(gè)專門的組合來(lái)從所檢測(cè)到的熒光發(fā)射偏析入射照明光。

  • 熒光和相襯顯微鏡組合 -傳統(tǒng)相襯光學(xué)上可配上熒光顯微鏡觀察熒光的空間分布在客廳和固定細(xì)胞和地圖的發(fā)射強(qiáng)度,以特定的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器。 因?yàn)橄辔粚?duì)比技術(shù)需要被修改的環(huán)狀孔( 聚光鏡環(huán)形帶 ),并與空間濾波器( 相板 )定位在目標(biāo)后側(cè)焦平面檢測(cè)透射光照明,viewfields必須被獨(dú)立地選自熒光,以捕獲獲得*佳的對(duì)比度。 然后將得到的圖像進(jìn)行組合(疊加)在空間上映射的熒光強(qiáng)度,蜂窩體系結(jié)構(gòu)的功能。 一些制造商提供低密度相位板,使活細(xì)胞的相襯和熒光的同時(shí)成像。

  • 弗蘭克-康登原理 -執(zhí)政的熒光現(xiàn)象,它是基于一個(gè)事實(shí),即在電子躍遷(由垂直線的弗蘭克-康登或Jablonski簡(jiǎn)圖表示)的分子核是靜止的一個(gè)基本概念。 電子躍遷從基態(tài)到較高能級(jí)激發(fā)態(tài)發(fā)生在這么短的時(shí)間內(nèi)(以毫微微秒為單位)的核沒(méi)有足夠的時(shí)間來(lái)產(chǎn)生振動(dòng)。 作為結(jié)果,只有電子躍遷從基態(tài)到可能發(fā)生的興奮是那些其中在基態(tài)和激發(fā)態(tài)的電子位置的概率*大重疊。

  • 完整的半值寬度(FWHM) -發(fā)射波長(zhǎng)的由玻璃或干涉濾光器的帶通區(qū)域由半*大值(簡(jiǎn)稱FWHM)稱為全寬的參數(shù)描述。切口上,并切斷邊界被定義為下部和上部的波長(zhǎng)通過(guò)的濾波器產(chǎn)生*大透射率的50%,并且中心波長(zhǎng)(CWL)是在帶通區(qū)域的波長(zhǎng)的算術(shù)平均值。 例如在40的FWHM表示發(fā)送帶寬跨越40納米,并且可以在紫外線,可見光或紅外線區(qū)域的任意位置具有一個(gè)CWL。 的半峰全寬也存在于許多課本稱為半帶寬(HBW)。

  • 綠色熒光蛋白(GFP) -來(lái)自水母Aequorea victoria的 ,也就是通常用來(lái)確定在活細(xì)胞和組織的位置,濃度,相互作用和靶蛋白的動(dòng)態(tài)衍生的天然存在的蛋白質(zhì)熒光探針。 增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(一種遺傳衍生物)的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜具有*大值在489納米和508納米,分別。 在為了將綠色熒光蛋白(或任何其遺傳衍生物)導(dǎo)入細(xì)胞,該基因的DNA序列被連接到編碼目的蛋白質(zhì)的DNA。 經(jīng)過(guò)培養(yǎng)的細(xì)胞已轉(zhuǎn)染了修飾的DNA,它們能夠表達(dá)嵌合熒光蛋白的觀察用顯微鏡。

  • 固有生命 -定義為激發(fā)態(tài)在沒(méi)有了競(jìng)爭(zhēng)激發(fā)態(tài)電子的任何失活過(guò)程的生命周期中,內(nèi)在的壽命是衡量的速率常數(shù)熒光衰變的倒數(shù)。 在實(shí)踐中,熒光團(tuán)的測(cè)定壽命的固有熒光壽命和非熒光過(guò)程(淬火,非輻射松弛,等等)導(dǎo)致的激發(fā)態(tài)弛豫的組合。測(cè)得的壽命總是小于固有壽命,是量子產(chǎn)率的一個(gè)指標(biāo)。

  • 等吸光點(diǎn) -當(dāng)熒光染料的經(jīng)歷在平衡的化學(xué)或物理反應(yīng)的激發(fā)或發(fā)射光譜被記錄為每個(gè)種類的濃度的函數(shù)的等吸光點(diǎn)通常被觀察到。 發(fā)射與波長(zhǎng)(或頻率)這樣的混合物的曲線往往會(huì)相交于一個(gè)或多個(gè)點(diǎn)(波長(zhǎng)),稱為等吸收點(diǎn)。 的效果,也可能出現(xiàn)在光譜中的一組的兩個(gè)或更多個(gè)不相關(guān)的,具有相同的總濃度無(wú)相互作用的熒光染料。 在一個(gè)單一的化學(xué)物質(zhì),在等吸收點(diǎn)將會(huì)出現(xiàn)在其中的摩爾消光系數(shù)是相等的所有波長(zhǎng)。 作為一個(gè)例子,熒光染料Fura-2的激發(fā)光譜顯示一個(gè)等吸收點(diǎn)在362納米時(shí)的稀溶液進(jìn)行滴定,用鈣。

  • 雅布隆斯基圖 -由基態(tài)和激發(fā)態(tài)電子在熒光分子占據(jù)能級(jí)的圖形化描述。 單線態(tài)和三線態(tài)激發(fā)態(tài)通常是單獨(dú)示出,但彼此相鄰。 該Jablonski簡(jiǎn)圖識(shí)別電子態(tài)和振動(dòng)能級(jí)的相對(duì)能量位置為一系列的水平線。國(guó)家之間的電子躍遷是由直線的垂直線(激發(fā)和發(fā)射)表示,而內(nèi)部轉(zhuǎn)換,振動(dòng)弛豫,淬火現(xiàn)象是由波浪垂直線表示。單重態(tài)和三重態(tài)之間的系間竄越被斜直線或波浪線所示。

  • 液晶可調(diào)諧濾波器(LCTF) -一個(gè)電子控制裝置,使光成像質(zhì)量的過(guò)濾,同時(shí)提供一個(gè)清晰的光圈光學(xué)顯微鏡。這些過(guò)濾器通過(guò)一系列所構(gòu)成的雙折射材料層成對(duì)的液晶層和兩個(gè)線性偏振片之間夾著波片的操作。液晶層的雙折射是微調(diào),通過(guò)改變施加到相鄰的層的透明導(dǎo)電涂層上的電壓。進(jìn)入過(guò)濾偏振光的波片,其被衰減,并轉(zhuǎn)換成幅值變化由分析器(第二偏振片)經(jīng)歷了一個(gè)波長(zhǎng)相關(guān)的旋轉(zhuǎn)。LCTFs旨在通過(guò)改變液晶的雙折射性質(zhì)和采用多個(gè)波片串聯(lián)來(lái)控制濾波參數(shù)。

  • 長(zhǎng)通(LP)濾波器 -即衰減較短的波長(zhǎng)和發(fā)送的光學(xué)干涉或有色玻璃過(guò)濾器(合格)在目標(biāo)光譜(紫外線,可見光或紅外線)的活性范圍更長(zhǎng)的波長(zhǎng)。長(zhǎng)波通濾波器,其可以具有非常尖銳的斜率(以下稱為邊緣過(guò)濾器),是由截止波長(zhǎng)在峰值傳輸?shù)?0%說(shuō)明。在熒光顯微鏡下,長(zhǎng)通濾波器是經(jīng)常使用的二色鏡和屏障(排放)濾波器。使用舊術(shù)語(yǔ)的高通來(lái)形容長(zhǎng)通濾波器現(xiàn)已氣餒,因?yàn)樗鼫?zhǔn)確地指的是頻率,而不是波長(zhǎng)。

  • 發(fā)光 -光從發(fā)生從電子激發(fā)態(tài)產(chǎn)生的或者由一個(gè)物理的(光吸收)的任何物質(zhì)(通常是一個(gè)分子或原子)的排放,機(jī)械或化學(xué)的機(jī)理。發(fā)光正式分為兩大類,熒光磷光,這取決于該激發(fā)態(tài)和發(fā)射通路中的電子配置。發(fā)光的產(chǎn)生可通過(guò)紫外光或可見光光子(發(fā)生過(guò)激勵(lì)的光致發(fā)光),一個(gè)電子束(陰極射線),施加熱(熱釋),化學(xué)能(化學(xué)發(fā)光),生物化學(xué)酶驅(qū)動(dòng)的反應(yīng)(生物發(fā)光),或通過(guò)能量從一個(gè)機(jī)械作用(摩擦發(fā)光),如摩擦。

  • 微通道板 -一盤,包括毛細(xì)管的壓縮數(shù)組,用金屬墻,這是專為第二代放大光電子信號(hào)(及更高代)圖像增強(qiáng)器。從增強(qiáng)靶光電子被加速到板,并進(jìn)行多次碰撞和電子的擴(kuò)增事件與所述管壁,從而產(chǎn)生一個(gè)大的電子級(jí)聯(lián)和原始光子信號(hào)的放大。微通道板是在熒光顯微鏡檢測(cè)到非常微弱的發(fā)射信號(hào)非常有用。

  • 全內(nèi)反射熒光顯微鏡(TIRFM) -一個(gè)旨在探測(cè)熒光標(biāo)記活細(xì)胞的表面與光束不同折射率的兩種介質(zhì)之間旅行所產(chǎn)生的倏逝波技術(shù)。在實(shí)踐中,入射激光束被以臨界角(全內(nèi)反射)反射時(shí),遇到一個(gè)顯微鏡載玻片和含有細(xì)胞的水性介質(zhì)之間的界面時(shí)。內(nèi)表面的幾個(gè)納米的熒光團(tuán)是由倏逝波激發(fā),而距離越遠(yuǎn)則不受影響。該技術(shù)通常被用來(lái)研究分子的相互作用表面的地區(qū),這個(gè)地區(qū)是具有根本的重要性,以廣泛的細(xì)胞和分子生物學(xué)學(xué)科的頻譜。

  • 發(fā)送的波前畸變(TWD) -失真引入到一個(gè)平面波陣面時(shí),通過(guò)光學(xué)元件透射的程度。傳輸波前畸變是衡量一個(gè)波長(zhǎng)(通常為550或630納米)的分?jǐn)?shù)或倍數(shù)。所發(fā)射的波陣面的畸變因表面平坦性的變化沿所述光學(xué)元件的外表面,以及從內(nèi)部不連續(xù)性和折射率的不均勻性。

  • 三重態(tài) -對(duì)于任何多電子系統(tǒng)(在原子和分子),當(dāng)電子自旋是不成對(duì)的電子結(jié)構(gòu)被稱為三重態(tài)。另外,對(duì)于其他的量子數(shù)的值相等,更高多重的狀態(tài)是低能量的狀態(tài)。因此,激發(fā)三重態(tài)能量具有比相應(yīng)的單重態(tài)下。自旋量子數(shù)(S的原子或分子)是該系統(tǒng)中的電子自旋的總和的*值。這樣一個(gè)系統(tǒng)的多重性被定義為量2S +1,并與平行(未配對(duì))旋轉(zhuǎn)的三重態(tài)的雙電子系統(tǒng),自旋量子數(shù)為1和多重性為3。

  • 兩個(gè)光子(多光子)顯微 -激光掃描共聚焦顯微鏡,其中熒光染料的激發(fā)是基于紅外或長(zhǎng)波長(zhǎng)可見光激光束,其能量密度的衍生物技術(shù)被調(diào)整為允許倍頻或在光束聚焦點(diǎn)在試樣三倍。在試樣中的熒光團(tuán)由兩個(gè)或三個(gè)光子同時(shí)激發(fā)而產(chǎn)生的激發(fā)態(tài)轉(zhuǎn)換的相當(dāng)于單光子熒光。例如,二,三光子激發(fā),在900毫微米相當(dāng)于勵(lì)磁由450分別高能量光子和300納米。多光子顯微鏡能夠深深滲透到厚的組織和省去了一個(gè)針孔孔徑因?yàn)闊晒獍l(fā)射被限制在一個(gè)單一的焦平面上。

  • 體繪制 -用算法來(lái)創(chuàng)建三維圖像從任意角度的計(jì)算機(jī)可視化,無(wú)需任何中間設(shè)置為代表的表面幾何數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換的技術(shù)。在激光掃描共聚焦顯微鏡,體繪制通常是從熒光標(biāo)本采集制作在三維空間中樣本的半現(xiàn)實(shí)的模型光學(xué)部分棧進(jìn)行。

  • 楔(平行度) -在弧分或從平行平板光學(xué)元件(通常是一個(gè)過(guò)濾器或窗口)的外表面之間的變化的弧秒的測(cè)量。顯著楔角可以引入一個(gè)角偏差對(duì)波前穿過(guò)元件,從而導(dǎo)致圖像的變化和準(zhǔn)誤差時(shí),光纖位于所述成像路徑。對(duì)于一個(gè)典型的過(guò)濾器元件或窗口,角度偏差的程度是大約二分之一的楔角。在內(nèi)部鍍膜的表面楔工件可以產(chǎn)生重影圖像作為離軸內(nèi)反射的結(jié)果。

  • 縮放 -在激光掃描共聚焦顯微鏡,將變焦倍率控制允許在不同掃描在試樣上的光柵面積相當(dāng)程度的靈活性,因此提供了在橫向像素大小的連續(xù)控制(x - Y)試件平面。變焦控制有助于通過(guò)使顯微鏡的操作一致性,每股*小可分辨光學(xué)成像點(diǎn)兩個(gè)以上像素的奈奎斯特/香農(nóng)采樣標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化的圖像信息內(nèi)容。變焦控制通過(guò)調(diào)節(jié)檢流計(jì)的電流水平調(diào)節(jié)掃描鏡偏轉(zhuǎn)的程度