顯微鏡暗視場(chǎng)觀察法

暗視場(chǎng)觀察法，可以觀看通常的動(dòng)植物組織切片、血液圖片、硅藻片。在觀察透明的活體標(biāo)本方面，如含有細(xì)菌的液體更顯出其**性。值得指出的是，它還能觀察到小于物鏡分辨率的微粒。這些
微粒在黑暗的背景中以亮點(diǎn)形式出現(xiàn)，使觀察者能觀察到它們的存在和移動(dòng)，有人稱此為*顯微術(shù)。

要實(shí)現(xiàn)暗場(chǎng)效應(yīng),*簡單的方法是在普通的阿貝聚光鏡下方插入一塊環(huán)形光闌，使照明的*小孔徑角大于物鏡數(shù)值孔徑即可。

左圖為暗場(chǎng)觀察法的光學(xué)原理圖。
圖中：
1． 環(huán)形光闌
2． 阿貝聚光鏡
3． 物鏡
集光鏡射出的光束，經(jīng)暗場(chǎng)環(huán)形光闌后以環(huán)狀光束射向阿貝聚光鏡。然后以環(huán)狀的光錐照明標(biāo)本，光錐*小角度即照明孔徑角，它必須大于物鏡的數(shù)值孔徑。

如果標(biāo)本片內(nèi)無任何東西，那么照明光線不可能進(jìn)入物鏡,視場(chǎng)內(nèi)漆黑一片。反之，標(biāo)本片內(nèi)存在某些東西如細(xì)菌等微粒，那么由于光的衍射與散射作用，這些光線就進(jìn)入物鏡并成象，視場(chǎng)內(nèi)將看到漆黑的背景中存在許多明亮的標(biāo)本象。用插片方式實(shí)現(xiàn)簡易暗場(chǎng)，價(jià)格低廉，但只能與放大率≤40x 的物鏡配合使用。由于阿貝聚光鏡內(nèi)的雜散光及色差等因素視場(chǎng)背景難達(dá)到完全漆黑的程度。

要達(dá)到理想的暗場(chǎng)效果，*好采用專用的暗場(chǎng)聚光鏡。這種聚光鏡有干燥型、浸液型之分。
干燥型暗場(chǎng)聚光鏡有幾種形式，它們的共同點(diǎn)是在一個(gè)透鏡上有多個(gè)球面。其中兩個(gè)是反射面，其余面是折射面。光束經(jīng)過它們后，*小照明孔徑約在0.75～0.78 之間。因此，與倍率≤40 倍物鏡匹配可以獲得很好的效果。左中圖為二種干燥型暗場(chǎng)聚光鏡：

浸液型暗場(chǎng)聚光鏡由兩個(gè)相同材料的透鏡膠合而成。加上浸油后，*小照明孔徑約1.22，適合與100 倍油浸物鏡配合使用。注意，物鏡中必須帶有可變孔徑光闌，能減少物鏡的數(shù)值孔徑。否則，部分照明光束將直接進(jìn)入物鏡而破壞暗場(chǎng)效果。其光學(xué)原理如左下圖。

注意:
－ 浸液型暗場(chǎng)聚光鏡使用時(shí)必須在載玻片與聚光鏡間滴上浸油。
－ 這種聚光鏡還能與干燥型物鏡配合使用。特別是高倍率的干燥型物鏡，能取得很好的效率。其缺點(diǎn)是，照明范圍較小。因此與低倍率物鏡，特別是4 倍物鏡，只能在視場(chǎng)中心部分可以進(jìn)行暗場(chǎng)觀察，而四周無光線照明，呈現(xiàn)一片黑暗。

暗場(chǎng)效果的好壞與使用時(shí)聚光鏡的調(diào)節(jié)有很大關(guān)系。舉簡單暗場(chǎng)調(diào)節(jié)實(shí)例：
－ 標(biāo)本上放置一半透明紙。
－ 打開可變孔徑光闌，升降帶有暗場(chǎng)插片的聚光鏡，使半透明的紙上呈現(xiàn)明亮圓形的光斑。
－ 調(diào)整聚光鏡對(duì)中螺釘，使照明光軸與物鏡光軸重合，此時(shí)視場(chǎng)背景應(yīng)均勻黑暗。