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徠卡顯微鏡：熒光蛋白 - 從入門到諾貝爾獎(jiǎng)
熒光蛋白是最近熒光顯微鏡及其現(xiàn)代應(yīng)用的根本。他們的發(fā)現(xiàn)和隨后的發(fā)展是最令人興奮的創(chuàng)新在上個(gè)世紀(jì)的生命科學(xué)和無數(shù)自然現(xiàn)象破譯的起點(diǎn)之一。這篇文章是獻(xiàn)給誰參與了熒光蛋白的命運(yùn)輸入其科學(xué)的參與到人。它應(yīng)該給一個(gè)最美麗的生化工具，從一開始到諾貝爾獎(jiǎng)的漫長(zhǎng)道路的洞察。?????早期的熒光觀察熒光蛋白的人的興趣可以追溯到公元一世紀(jì)時(shí)，羅馬自然哲學(xué)家老普林尼描述[?1?]（蓋烏斯皮林紐斯Secundus，公元2
2020-09-04
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尼康顯微鏡：在多光子激發(fā)顯微術(shù)的基本原理和應(yīng)用
雙光子激發(fā)顯微鏡（也稱為非線性的，多光子或雙光子激光掃描顯微鏡）是一種替代共聚焦和去卷積顯微鏡三維成像，提供了明顯的優(yōu)勢(shì)。特別是，雙光子激發(fā)成像擅長(zhǎng)的活細(xì)胞，尤其是在完整的組織，如腦切片，胚胎，整個(gè)器官，甚至整個(gè)動(dòng)物。有效靈敏度的熒光顯微鏡，特別是與厚的樣品，通常是有限的焦點(diǎn)外的喇叭形。此限制，大大降低了在共聚焦顯微鏡中，通過使用共焦針孔拒絕焦點(diǎn)外的背景熒光，并產(chǎn)生?。ㄐ∮?微米），unblurr
2020-09-04
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徠卡顯微鏡：活細(xì)胞成像技術(shù)
復(fù)雜和/或快速的細(xì)胞動(dòng)力學(xué)的理解是探索生物過程的一個(gè)重要步驟。因此，今天的生命科學(xué)研究越來越注重動(dòng)態(tài)過程，如細(xì) 胞遷移，細(xì)胞，器官或整體動(dòng)物形態(tài)學(xué)變化和生理（如細(xì)胞內(nèi)的離子成分的變化）事件實(shí)時(shí)的活標(biāo)本。解決這些具有挑戰(zhàn)性的需求的方法之一是采用若干統(tǒng)稱活細(xì)胞成像的光學(xué)方法?；罴?xì)胞成像活細(xì)胞的動(dòng)力學(xué)過程，而不是給細(xì)胞的當(dāng)前狀態(tài)的一個(gè)“快照” -允許調(diào)查將改編成電影的快照?；罴?xì)胞成像提供了空間和時(shí)間信息
2020-09-04
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尼康顯微鏡：隨機(jī)光學(xué)重建顯微鏡（STORM）
所提供的寬視場(chǎng)的多個(gè)成像模式中，激光點(diǎn)掃描共聚焦，多光子熒光顯微鏡允許非侵入性的，固定和活細(xì)胞和組織中有高水平的特異性生化時(shí)間分辨成像。盡管傳統(tǒng)的熒光顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)，該技術(shù)在超微結(jié)構(gòu)的調(diào)查，由于光的衍射，可以與標(biāo)準(zhǔn)的目標(biāo)捕獲的信息量限制設(shè)置的分辨率極限的阻礙。在過去的幾年中，已經(jīng)采用了一些新穎的儀器為基礎(chǔ)的方法來規(guī)避衍射極限，包括近場(chǎng)掃描光學(xué)顯微鏡（NSOM），受激發(fā)射損耗（STED）顯微鏡，
2020-09-04
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尼康顯微鏡，熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）顯微鏡與熒光蛋白的基本原理
在活細(xì)胞中，動(dòng)態(tài)的蛋白質(zhì)之間的相互作用被認(rèn)為是發(fā)揮了關(guān)鍵作用，調(diào)節(jié)許多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，以及廣泛的其他關(guān)鍵流程。 在過去，經(jīng)典的生物化學(xué)方法，闡明了這種相互作用的機(jī)制是司空見慣，但是弱的或短暫的相互作用，可能會(huì)發(fā)生細(xì)胞內(nèi)的天然環(huán)境是這些技術(shù)通常是透明的。 例如，合作一直懷疑蛋白本地化合作伙伴使用固定細(xì)胞免疫熒光顯微鏡檢查相互作用在原地 ，并已提交了大量的文獻(xiàn)報(bào)道基于這種技術(shù)的常用方法。 然而，由于在
2020-09-04
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奧林巴斯顯微鏡，熒光和生物發(fā)光蛋白
生物體的廣譜能夠通過生化機(jī)制，包括螢火蟲，水母和某些細(xì)菌發(fā)光的。 一些這些生物體的發(fā)射光通過吸收特定波長(zhǎng)的光，而其他通過消耗身體內(nèi)儲(chǔ)存的能量發(fā)射光。熒光蛋白通過吸收和重新發(fā)射的光的能量發(fā)出熒光。 水母，珊瑚，海葵和某些細(xì)菌有自己的身體內(nèi)這種蛋白質(zhì)。 另一方面，生物發(fā)光來源于體內(nèi)的化學(xué)反應(yīng);實(shí)例包括夜光屬的螢火蟲和物種。 發(fā)光物質(zhì)要么是位于細(xì)胞（螢火蟲和夜光 ）內(nèi)或分泌到外部（Cypridinac
2020-09-04
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尼康顯微鏡Lambda堆棧的基本概念
類似的概念來使用的激光掃描共聚焦或解卷 積顯微術(shù)高數(shù)值孔徑物鏡較厚的標(biāo)本中獲得的光學(xué)部分 （ 或 z棧）中，lambda堆棧的三維數(shù)據(jù)集，它由使用相同的試樣場(chǎng)的圖像采集在不同的波長(zhǎng)帶，每一個(gè)橫跨有限的光譜區(qū)域范圍從2到20納米的獲取。 相反，在各種形式的光學(xué)顯微鏡的典型成像方案涉及在檢測(cè)器的整個(gè)波長(zhǎng)響應(yīng)頻帶獲取單個(gè)圖像（或一個(gè)連續(xù)組中的延時(shí)實(shí)驗(yàn)圖像）。 本教程探討一個(gè)lambda棧的頻譜分量。教程
2020-09-04
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奧林巴斯顯微鏡的熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）
初級(jí)概念特定分子種類之間的相互作用的活細(xì)胞中的精確位置和性質(zhì)是在生物學(xué)研究的許多領(lǐng)域主要關(guān)心的，但是調(diào)查經(jīng)常被用來研究這些現(xiàn)象的文書的分辨率有限的阻礙。 常規(guī)寬視場(chǎng)熒光顯微鏡使在由瑞利判據(jù)，約200納米（0.2微米）所定義的光空間分辨率極限本地化熒光標(biāo)記的分子。 然而，為了理解所涉及的典型的生物分子的過程蛋白伙伴之間的物理相互作用，分子的相對(duì)接近度，必須更精確地確定比衍射限制的
2020-09-04