徠卡顯微鏡：激光顯微切割的原理

2020-09-04 09:28:43

組織學(xué)和生物樣本中的異質(zhì)性，往往需要在分析之前，可以進(jìn)行從周圍組織中的具體的單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群體的隔離。激光顯微切割是一種高選擇性的樣品制備方法，DNA，RNA和蛋白質(zhì)分析。它是精確的分離技術(shù)，用聚焦的激光束的樣品和組織的顯微鏡操控。

激光顯微切割的原則

要進(jìn)行顯微切割，直立或倒置顯微鏡的激光被耦合到。選定的區(qū)域或什至是單個(gè)細(xì)胞，然后通過(guò)移動(dòng)聚焦激光束沿其輪廓上切。此過(guò)程保證溫柔試樣的處理 - 特別是，它不傳輸任何熱的試樣 - 完全相同，并提供分析所需的材料，是。

dissectate然后輸送到收集裝置中的許多不同的方式。解剖組織，具體取決于所使用的系統(tǒng)下降到反應(yīng)容器中（徠卡微LMD系統(tǒng)）在重力的作用，被彈射的反應(yīng)容器（PALM系統(tǒng)中）對(duì)在重力的作用進(jìn)入或間接地除去用膜覆蓋樣品（大角星和MMI系統(tǒng)）。徠卡LMD和Palm系統(tǒng)也可以用于激光顯微操作，例如通過(guò)削減在細(xì)胞分裂過(guò)程中紡錘體纖維。

激光顯微切割是一個(gè)既定的大量的應(yīng)用，主要是在分子生物學(xué)，特別是核酸研究，神經(jīng)科學(xué)，發(fā)育生物學(xué)，癌癥研究，取證，蛋白質(zhì)組學(xué)，植物研究，切割細(xì)胞培養(yǎng)和單細(xì)胞隔離的方法。激光顯微切割甚至用于氣候研究，特別是對(duì)研究樹木的年輪。

LMD_principle

圖 1：激光顯微切割（徠卡顯微系統(tǒng)LMD系統(tǒng)）原理。第1步：定義感興趣的區(qū)域。第2步：激光束沿切割線的光學(xué)操縱。步驟3：標(biāo)本采集的嚴(yán)重性。

非接觸式激光顯微切割的方法和技術(shù)

激光顯微切割提供精確和污染的解決方案，為單細(xì)胞或組織的分離和篩選。組織樣本可以被嵌入，根據(jù)常規(guī)方法制備的切片，染色。石蠟切片，冰凍切片，涂片制劑，染色體標(biāo)本和細(xì)胞培養(yǎng)都適合激光顯微切割。解剖選定的區(qū)域繪制在電腦屏幕上，并用激光束從周圍組織中自動(dòng)分離。熒光標(biāo)記也可以使用特殊的濾光塊的激光傳輸?shù)娜轿唤馄蕵?biāo)本。該dissectate然后立即輸送到收集裝置（以不同的方式，根據(jù)該系統(tǒng)的制造商）做進(jìn)一步的檢查。

有不同的激光顯微切割技術(shù)。PALM系統(tǒng)，例如，在一個(gè)固定的激光束移動(dòng)的試樣。在這里，所選擇的區(qū)域被切去從周圍組織中，由一個(gè)單一的激光脈沖被激活之后，非接觸式運(yùn)輸。所選擇的組織被提升從檢體滑動(dòng)，彈射到一個(gè)集合中的移動(dòng)設(shè)備對(duì)在重力的作用。

在重力的作用是選擇徠卡系統(tǒng)的方法。在這里，樣品被固定，并且在它被移動(dòng)的激光束。這樣便于觀看的樣品，落入收集裝置和dissectate單獨(dú)受力的重心。切削過(guò)程中的精確度是光耦合到所選擇的倍率。倍率越高，自動(dòng)導(dǎo)致更精細(xì)的步長(zhǎng)寬度的激光束和其運(yùn)動(dòng)是相同的程度減少。在這種情況下，沒有其他的工作步驟是必需的。不僅是單個(gè)細(xì)胞，而且較大的區(qū)域可以通過(guò)在一個(gè)單一切除。盡管轉(zhuǎn)移dissectate收集裝置的不同的方法，但沒有接觸或污染的風(fēng)險(xiǎn)。

然而，其他一些非接觸的方法也可用于激光顯微切割（大角星，MMI）。

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