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徠卡顯微鏡 - 熒光壽命成像之FLIM-FRET應(yīng)用淺析
FRET 技術(shù)（Fluorescence Resonance Energy Transfer）能夠在突破傳統(tǒng)光學(xué)分辨率極限的條件下研究蛋白互作、構(gòu)象變化（<10 nm），或者通過構(gòu)建 FRET 探針監(jiān)測分子變化，因而在諸多研究領(lǐng)域得到了“科研大拿”們的青睞
2020-09-04 admin
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尼康顯微鏡，熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）顯微鏡與熒光蛋白的基本原理
在活細胞中，動態(tài)的蛋白質(zhì)之間的相互作用被認為是發(fā)揮了關(guān)鍵作用，調(diào)節(jié)許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，以及廣泛的其他關(guān)鍵流程。 在過去，經(jīng)典的生物化學(xué)方法，闡明了這種相互作用的機制是司空見慣，但是弱的或短暫的相互作用，可能會發(fā)生細胞內(nèi)的天然環(huán)境是這些技術(shù)通常是透明的。 例如，合作一直懷疑蛋白本地化合作伙伴使用固定細胞免疫熒光顯微鏡檢查相互作用在原地 ，并已提交了大量的文獻報道基于這種技術(shù)的常用方法。 然而，由于在
2020-09-04
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徠卡顯微鏡- 熒光成像新維度——超快速熒光壽命成像
熒光壽命是熒光基團在通過發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前在其激發(fā)態(tài)下保持平均多長時間的量度。不同熒光基團激發(fā)態(tài)停時間不同，大多數(shù)生物熒光素的熒光壽命時間在 0.2 - 20 ns。
2020-09-04 admin
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徠卡顯微鏡FRET與FLIM定量在體內(nèi)生物化學(xué)
熒光壽命是多久熒光團保留在平均在激發(fā)態(tài)通過發(fā)射熒光光子返回到基態(tài)之前的量度。它依賴于熒光團的分子的組合物和納米環(huán)境。FLIM結(jié)合壽命測量與成像：為每個圖像像素獲得的壽命是顏色編碼，以產(chǎn)生更多的圖像對比度。因此，F(xiàn)LIM有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息提供關(guān)于熒光分子的空間分布的信息一起。FLIM的一個典型應(yīng)用是FLIM-FRET。FRET是一個行之有效的方法來研究分子間的相互作用。它審視蛋白結(jié)合，并
2020-09-04
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![徠卡顯微鏡：選擇你的激發(fā)波長]()
徠卡顯微鏡：選擇你的激發(fā)波長
熒光壽命成像顯微術(shù)（FLIM）被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)相互作用量化測量FRET（福斯特共振能量轉(zhuǎn)移）發(fā)生的兩個熒光基團之間的間隔由幾納米。FLIM也被用來在大陣列的應(yīng)用范圍從組織成像熒光探測環(huán)境。雖然時間相關(guān)的單光子計數(shù)（TCSPC）熒光壽命定量方法的選擇，它要求包括：i）一個脈沖激光源，2）光子計數(shù)卡，及iii）一個快速檢測的專用儀器。這種技術(shù)要求呈現(xiàn)TCSPC收購很難執(zhí)行和/或縮小選擇可用熒光。徠卡
2020-09-03
